熒光探針和熒光染料凍干防護(hù)

凍干對熒光探針和熒光染料有防護(hù)作用，凍干可防止探針和染料降解，提高反應(yīng)的靈敏度和特異性。接著介紹一下熒光探針和熒光染料的特性。熒光探針是PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對引物的同時(shí)加入熒光探針，探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。熒光染料是在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料非特異性地?fù)饺?/span>DNA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進(jìn)行結(jié)合，因此可以通過溶解曲線，確定PCR反應(yīng)是否特異。低溫預(yù)凍，低溫真空干燥，過程隔離氧氣水分，凍干法可*防止熒光物質(zhì)降解。試劑凍干機(jī)Pilot3-6T IVD方面應(yīng)用示例（熒光PCR）：

1. 探針、底物、引物原料要求確定。
2. 凍干溶液配方開發(fā)，采用正交法或響應(yīng)曲面法進(jìn)行輔料篩選。
3. 選擇適合的包材和模具。
4. 設(shè)計(jì)凍干曲線配合輔料篩選。
5. 確定配方及工藝。
6. 穩(wěn)定性測試。
7. 根據(jù)穩(wěn)定性測試結(jié)果修正工藝或配方。
8. 整個環(huán)節(jié)注意環(huán)境、設(shè)備、人員的結(jié)合。